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血清可溶性白介素的檢測(cè)方法

更新時(shí)間:2012-07-23   點(diǎn)擊次數(shù):2827次

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解sIL-2R檢測(cè)的基本原理

2.掌握sIL-2R檢測(cè)的方法的臨床意義。

實(shí)驗(yàn)原理

sIL-2R可與細(xì)胞膜表面的受體(IL-2R)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合IL-2,從而成為一種免疫抑制物質(zhì)。在正常人血清和尿液中可檢出低水平的sIL-2R,在某些疾病發(fā)生時(shí)如器官移植、排斥反應(yīng)、病毒性感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷和自身免疫病等,sIL-2R在血清和其他體液中的水平增高,且與病情、病程密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心法測(cè)定原發(fā)性肝癌患者血清sIL-2R水平。(夾心法原理參見(jiàn)實(shí)驗(yàn)五免疫酶技術(shù))

即: 抗體-——待檢血清——抗體——酶標(biāo)抗抗體——顯色

實(shí)驗(yàn)用品

1.材料、試劑:待測(cè)人血清、IL-2Rα陽(yáng)性、陰性參考血清、IL-2Rα單抗、兔抗IL-2Rα多克隆抗體、酶結(jié)合物(HRP-抗兔IgG)、顯色A液、B液、PBS洗滌液、終止液。

2.器具:吸管、滴管、試管、48孔聚苯乙烯反應(yīng)板、50μl微量移液器、恒溫箱(370C)

實(shí)驗(yàn)方法

預(yù)步驟:先用一定濃度的IL-2Rα單抗包被聚苯乙烯板的小孔,4℃冰箱過(guò)夜,次日取出甩盡液體備用。

(1)微量移液器分別加待檢血清、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照各50μl于1、2、3孔中,370C水浴箱溫育40min。

(2)PBS液洗板3次,每次3min,甩干。

(3)每孔加入兔抗IL-2Rα多抗,370C水浴箱溫育30min。

(4)用PBS液洗板3次,每次3min,甩干

(5)每孔加入酶結(jié)合物(HRP-抗兔IgG)2滴,370C水浴箱溫育30min。

(6)每孔分別加入顯色A液、B液各1滴,混勻。370C水浴箱溫育5-10min。

取出肉眼觀察結(jié)果。如待檢血清溶液與陽(yáng)性對(duì)照一致均為藍(lán)色,表明待檢血清為sIL-2R陽(yáng)性血清。

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