jizz日本-亚洲色播永久网址大全-夜夜揉揉日日人人青青-亚在线第一国产州精品99-久久久久国内精品影院

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > ELISA實驗操作要點:固體樣本處理方法

ELISA實驗操作要點:固體樣本處理方法

更新時間:2022-04-27   點擊次數:1702次

 固體樣本處理方法:
    固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細胞內的蛋白,要先收集細胞,再用合適方法破碎,離心取上清測試。
1、組織標本:切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就用液氮研磨,將植物組織放在研缽中,加入適量液氮,充分研磨。
2、細胞內蛋白樣本:
許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
(1)培養的細胞
A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融(如果反復凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
B、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)組織的細胞
切割標本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。
3、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內蛋白,要破碎細胞。
5. 植物標本的采集及保存 :
(1) 稱取0.1g(誤差±3%以內)新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;
(2)加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度過一夜;
(3) 于4度,8000rpm,離心1小時,取上清;
(4) 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用*甲醇(5ml)洗柱→*(5ml)洗柱→*甲醇(5ml)洗柱→循環。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存備用;
(5)上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)。混勻后室溫放置30分鐘,然后4度離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4度待用。
樣本收集注意事項:
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標本采集后盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發表的文獻,自行設計合理的樣本處理方法。

  注:凡購買我司BIM試劑盒的客戶,均贈送高附加值的技術咨詢服務,讓您的科研健步如飛!




主站蜘蛛池模板: 亚洲精品无码久久久久久| 热re99久久精品国99热| 国产主播一区av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品劲| 久久久噜噜噜久久免费| 人妻少妇乱子伦无码视频专区 | 九九久re8在线精品视频| 久久精品国产一区二区三区不卡 | 日韩欧美国产视频一区二区| 国产精品天天看天天狠| 成人久久久| 亚洲欧洲免费一区二区| 精品久久久久久无码人妻蜜桃| 成年无码动漫av片在线观看羞羞| 亚洲色偷精品一区二区三区| 久久久久琪琪去精品色无码| 亚洲人成在线观看| 黄色一级一区二区中文字幕| 国产性猛交普通话对白| 天天躁躁水汪汪人碰人| 欧美 亚洲 另类 综合网| 日本女同性恋一区二区| 伊人久久大香线蕉av网禁呦| 国产精品久久久久久久久久久久午夜片| 看全黄大色黄大片美女| 亚洲中文字幕无码天堂男人| 色视频在线观看免费视频| 国产三级a三级三级| 强迫大乳人妻中文字幕| 一区二区极品视频| 老司机亚洲精品影院无码| 日本内射精品一区二区视频| 18禁勿入网站入口永久| 日韩精品一区二区三区含羞含羞草| 亚洲国产精品久久久久久无码 | 3751色成人免费一区二区| 日韩好片一区二区在线看| 国产成人无码a区视频| 亚洲中文字幕一区精品自拍| 啦啦啦中文在线视频免费观看| 欧美无砖专区一中文字|